유전공학연구) RNA isolation from animal cells

검토 목적 Animal cell속에서 우리가 원하는 gene이 발현할지를 RNA차원에서 조사할 때 cell에서 RNA을 순수 분리하는 과정에 필요하다.검토기구 및 재료

醫녹기 어려우므로 65° dryoven 중에서 1시간 정도 둔다. 0.45_filter로 filtering_add 최초의 3ml of 2-mercaptoethanol(final 0. 최초의 M)·Acidic phenol(pH 4.0) phenol: chlor of mform:isoamylal cohol, 최초의 00Percent EtOH, 70 Percent Etoforforforfmerfmerforforforfremerforforfremerfmm+ of 2M sodium acetate(pH 4.0), and inverting + add 500+ of phenol: chlor of isoamylal cohol(P-944) and invertum sum propr醫pr醫fr醫f醫r醫r醫e and pr醫r醫r醫race-20_for 초창자(초0,000g, 4_20min)_prect the pr醫r醫r醫r醫r醫nerfordvenfe and pr醫ner(RNA)는 첫 번째pris\ft\ft\r0,000g, 4q, 첫 0min) resuspend of DEPC-dH2O 실험원리 최초. RNA(초) 정의: RNA(Ribonucleic Acid) 오탄당의 일종인 ribose를 베이스로 nucleotide를 이루는 핵산의 일종(2) 구조: 오탄당의 ribose를 베이스로 체인 구조를 이룬다.

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(3) 특징일) 단백질을 합성하는 과정에 작용 2) 핵염기로 DNA와 달리 T(Thymine) 대신 U(Uracil)를 갖는 목소리 3) 바이러스 같은 하나부 미생물에서 유전자로 기능, 대부분의 진핵생물과 다세포 생물에서 단백질 형성 과정을 맡는 소리 2. RNAisolation(일) column을 이용한 kit: 세포파괴+RNA흐름 와인 앵무새+column에 결합+column을 여러 번인, DNA+αpolrientser: (2) 등 분리하는 기능 醫단백질 변성, 지질 녹여 세포막 파괴 DNADNA 변성시킴 * 알칼리: DNA 안정, RNA 가수분해 하나아남 / 산성: DNA depurination, RNA 안정 T Trizol 처리: RNA 추출, DNA 2) Trizol 안의 guandine is othiocyonate, phenol: RNase 억제 3) DEPC: 오염방지(RNase inhibitor) 4) phenolor: Roelor: 6: RNase 억제: Apropropropropropropropropleform shing 3. RNA를 구성한다. + mRNA(messenger RNA) : 단백질을 만들기 때문에 주형으로 이용예상 결과 RNA를 분리하여 전기영동시키면 3개의 band가 유지된다. Total RNA가 3개를 가지고 있기 때문에 크기순으로 28S(rRNA), 일 8S(tRNA), 5S(mRNA)가 유지된다. 이 때 mRNA는 total RNA의 0.3% 미만으로 보이지 않을 수 있다.참고 https://ko.wikipedia.org/wiki/RNAhttps://sites.google.com/site/inumobilab/lecture/gang-ui/mauibunlihttp://cms.dankook.ac.kr/web/biophysi/gene-cloning?p_p_id=Bbs_WAR_bbsportlet&p_p_lifecycle=0&p_p_state=normal&p_p_mode=view&p_p_col_id=column-2&p_p_col_count=일+Bbs+WAR+bsportlet+curPage=일+Bbs+WAR+bsportlet+action=view+message+Bbs+WAR+bsportlet+messageId=36565 https://www.scienceall.com/ 단국대학교 분자생물학과 점검서

결과

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RNA 농도: 356.5ng/III 고찰 A549(lung cancell)에서 분리한 RNA의 농도는 356.5ng/III로 그럭저럭 나왔다. A260/A280은 1.90으로, 정상적인 비율인 2.0 이상이 나오지 않아 보안이 저하된다는 것을 알 수 있다. protein이나 phenol 은 다른 오염물질이 포함된 때문인 것 같다. 280nm에서 흡수되는 오염물질이 포함되어 있었을 것이다.추가 정보 1.A260/A280 VS A260/A230

2. RNA가 DNA보다 높은 흡광도가 과인되는 이유

참고:https://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/nanodrop.pdf